TERAPIA GÉNICA EN DIABETES MELLITUS

USO TERAPÉUTICO DE LA LEPTINA RECOMBINANTE HUMANA

La leptina recombinante humana ha demostrado ser eficaz en el tratamiento de la obesidad por deficiencia congénita de leptina, en la lipodistrofia generalizada genética o adquirida, y en la amenorrea hipotalámica. De todas estas patologías,esta hormona sólo ha sido autorizada muy recientemente por la FDA para el tratamiento de dos formas infrecuentes de lipodistrofia, la congénita generalizada (Síndrome de Berardinelli-Seip) y la adquirida generalizada (síndrome de Lawrence). En ellas la leptina mejora de forma ostensible y a largo plazo la hipertrigliceridemia, la diabetes mellitus y la esteatosis hepática.

Existen evidencias en seres humanos de que la leptina también podría mejorar la resistencia a la insulina y/o la dislipemia en la lipodistrofia parcial familiar, la lipodistrofia asociada al tratamiento con anti-retrovirales en el SIDA y en el síndrome de Rabson-Mendenhall.

Su utilidad en el tratamiento de la obesidad común y la diabetes mellitus tipo 2 es prácticamente nula, al menos en monoterapia. Más allá de sus efectos sobre el control del apetito, es probable que la leptina recombinante humana ejerza sus efectos en aquellas situaciones con una marcada deficiencia de esta hormona en relación con una reducción del depósito ectópico de lípidos, fundamentalmente en hígado y músculo, lo que disminuye la resistencia a la insulina. Sin embargo, en situaciones de normo- o hiperleptinemia, la resistencia o tolerancia a esta hormona podría limitar sus efectos.

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TERAPIA CON STEM CELLS

TERAPIA CON STEM CELLS EN DIABETES MELLITUS

El tratamiento clínico estándar consiste en la aplicación de insulina exógena, pero en un número importante de pacientes y debido a la dificultad en lograr un control metabólico preciso, se asocia con complicaciones graves del sistema cardiovascular, renal, la retina y los nervios periféricos. Esto motivó el desarrollo de otras alternativas de tratamiento, como el trasplante de células productoras de insulina. Este procedimiento puede realizarse en dos modalidades: como páncreas entero (órgano vascularizado) o como islotes pancreáticos (obtenidos luego de una digestión enzimática del órgano). La modalidad más extendida y que muestra los mejores resultados funcionales es el trasplante de páncreas entero, con supervivencias para el paciente y el páncreas de 94% y 87% a un año, respectivamente. A cinco años, estos valores llegan a 89% y 76%, respectivamente. 

En relación con el trasplante de islotes pancreáticos, el índice de insulinoindependencia a un año es menor que el 50%, y a cinco años, alrededor del 10% en los centros de mayor experiencia. Los mejores resultados con esta modalidad de trasplante se obtuvieron con la inyección sucesiva de islotes pancreáticos de diferentes donantes y terapia inmunosupresora exenta de corticoides (Protocolo de Edmonton). Sin embargo, la escasez de órganos por un lado, y el hecho de que cada implante de islotes de otro páncreas aumenta las posibilidades de rechazo inmunológico, hace que este tratamiento se vea limitado a centros de alta experiencia y pacientes muy seleccionados.

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TRANSGÉNICOS EN DIABETES MELLITUS

Modelos animales de intolerancia a la glucosa y diabetes tipo 2

Modelos espontáneos

Se trata de estirpes que se mantienen relativamente inalteradas mediante cruces endogámicos y que proceden bien de un animal en el que se ha detectado diabetes espontánea, bien de una serie de cruces selectivos favoreciendo un determinado rasgo fenotípico de la DM2 humana. A veces no son totalmente “espontáneos” en el sentido que se requieren modificaciones dietéticas adicionales para generar la diabetes en el seno de una predisposición genética, es el ejemplo del Psammomys obesus que comentamos más abajo

El mejor modelo espontáneo de DM2 es la rata GK, que fue desarrollado en la década de los 90 por dos investigadores japoneses mediante cruces endogámicos recurrentes de ratas no diabéticas (Wistar), pero con niveles plasmáticos de glucosa en el límite alto de la normalidad18. Dicho modelo reproduce bien las principales características de la DM2 humana: hiperproducción de glucosa, reducción de la tolerancia a la misma, deterioro en la secreción de insulina, aumento de la resistencia periférica a la insulina y alteración en el metabolismo lipídico. Típicamente, la glicemia en ayunas está sólo ligeramente elevada, pero aumenta considerablemente tras la ingesta de glucosa. Al nacer, la rata GK presenta un número reducido de islotes de Langerhans19.

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INFORME DE LABORATORIO DE TRANSGÉNICOS

TIPO DE ANIMAL: Ratones transgénicos "knockout"

PASOS:

1. Células Madre Aislar

2. Añadir gen inactivo con marcador

3. Genes similares Naturalmente Intercambia

4. Agregue Drogas

5. Crecer ratones quiméricos

6. Compañero masculino Chimera

7. Prueba y casta Offspring

8. Usted ha hecho un ratón knockout

USO: Se está estudiando cómo un gen particular, llamado Ohno, podría desempeñar un papel en los ataques de pánico.

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ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL EN DIABETES MELLITUS

TECNOLOGÍA DE ADN RECOMBINANTE

La tecnología de ADN recombinante consiste en la manipulación artificial de genes, o de segmentos complejos del genoma, para producir combinaciones genéticas nuevas, que no se encuentran usualmente en condiciones naturales en, los objetos biológicos (virus o células). 

Estos genes o segmentos genéticos pueden ser sometidos a clonamiento a través de generaciones celulares sucesivas mediante su inclusión en vectores moleculares construidos expresamente para fines establecidos. Los vectores pueden consistir en plásmidos, virus o combinaciones artificiales de ambos, llamadas cósmidos. Los cósmidos tienen la ventaja sobre los plásmidos y virus, de poder acomodar segmentos más grandes de ADN (hasta 35.000 pares de bases).

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ADN RECOMBINANTE EN DIABETES MELLITUS

ADN RECOMBINANTE EN DIABETES MELLITUS 

En los últimos 100 años, el conocimiento de la genética ha crecido exponencialmente. Hoy en día, combinando el ADN de dos organismos distintos con la técnica del ADN recombinante, son posibles muchos resultados.

Las hormonas como la insulina son creadas en cuerpos que funcionan normalmente. Esta hormona es una proteína que está hecha de una secuencia específica de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos está determinada por el ADN de una persona. 

La insulina ayuda a controlar la cantidad de azúcar en sangre. Anteriormente, los diabéticos usaban insulina porcina y vacuna, pero no era bien tolerada por todos los pacientes ya que su secuencia de aminoácidos es levemente diferente. Ahora insulina humana puede ser producida en masa a través de procesos de ingeniería genética. 

La tecnología recombinante del ácido desoxiribonucleico (ADN) ha permitido el desarrollo de la insulina humana; sin embargo, esta no ha resuelto totalmente los problemas relacionados con la inmunogenicidad, entre otros problemas. Por tanto, las nuevas tecnologías son aplicadas para crear los análogos de insulina.

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ARTÍCULO ANALIZADO DE PCR

Efectividad de la metformina en pacientes con diabetes tipo II según variantes en el gen SLC22A1

Detección de polimorfismos en el gen slc22a1 

Se obtuvo el ADN de los pacientes de sangre periférica usando el equipo comercial Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega, Madison, EE.UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se estudiaron 5 diferentes polimorfismos en el gen SLC22A1 (R61C, P341L, M420del, G401S y G465R), los cuales se analizaron mediante la técnica de PCR-RFLP (PCR-restriction fragment length polymorphism assay) usando primers específicos (diseñados por este equipo) en un termociclador MJ Research (Waltham, Massachusetts, EE.UU.).

La reacción de PCR se realizó usando 80 ng del ADN de los pacientes; 3 μL del buffer 5X de la enzima; 200 μM de cada dGTP, dATP, dCTP y dTTP; 10 μM de cada primer específico del polimorfismo Forward yReverse; 0.6 U de GoTaq polimerasa (Promega) y agua csp 15 μL. Los parámetros de ciclado fueron: 94 °C durante 2 min y luego 35 ciclos de 94 °C por 50 s, 58 °C por 50 s y 72 °C por 60 s y una extensión final a 72 °C por 5 min.

Los productos de amplificación fueron digeridos con endonucleasas de restricción específicas, luego separados por electroforesis en geles de agarosa (2,5% p/v) y visualizados por irradiación con luz ultravioleta luego de la tinción con bromuro de etidio.
Se tomaron 5 muestras al azar para ser analizadas por secuenciamiento del ADN, a fin de verificar si los resultados obtenidos por la técnica de PCR - RFLP eran coincidentes.

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